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產(chǎn)品說(shuō)明： 

     金擔(dān)子素 A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌 Aureobasidium pullulans No. R106 中 分離出來(lái)的環(huán)酯肽類抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力。在較低的濃度下（0.1-0.5μg/ml）即可 對(duì)酵母產(chǎn)生毒性。對(duì)其敏感的真菌種類包括：出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒 裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構(gòu)巢曲霉 （Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用機(jī)制在于 AbA 抑制了真菌生長(zhǎng)所依賴 的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而進(jìn)一 步殺死菌株。編碼 IPC 合成酶的基因研究較多的有來(lái)自釀酒酵母菌的 AUR1 基因，以及構(gòu) 巢曲霉的 AURA 基因，兩者具有同源性。通過(guò)對(duì)這些編碼基因進(jìn)行突變即可使得菌株對(duì) AbA  產(chǎn)生抗性，如 AUR1-C 基因。

     AbA 非常適合用作陽(yáng)性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。AbA 抗性也是酵母單/雙雜交研 究中理想的報(bào)告子。本品為溶于甲醇的 AbA 溶液，濃度為 1 mg/ml。具體的工作濃度取決于 宿主細(xì)胞的敏感度（見表 1.AbA 對(duì)各種酵母菌的最低抑菌濃度（MIC））。

產(chǎn)品性質(zhì)： 

分子式（Formula）：C60H92N8O11 

分子量（Molecular weight）：1100 

純度（Purity）：≥95% 

熔點(diǎn)（Melting point）：155-157℃ 

結(jié)構(gòu)式（Structure）：

操作步驟（抗 AbA 的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng)）： 

1. 加入 0.5 ml 過(guò)夜培養(yǎng)的酵母到 50 ml YPD 培養(yǎng)基中（配方：1L 液體培養(yǎng)基含有 10g  yeast extract，20g polypeptone，20g D-glucose；固體培養(yǎng)基另外加入 2%瓊脂）。 

2. 30℃培養(yǎng)約 6 小時(shí)，測(cè)定 OD660 為 1～2。使用二倍體時(shí)，測(cè)定 OD660 為 2～4。 

3. 1,000×g 離心 5 分鐘。 

4. 用 10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA） 懸浮沉淀，1,000×g 離心 5 分鐘。 

5. 用 Solution A 重懸沉淀，直到 OD660 為 150。 

6. 在管內(nèi)分取 100μl 細(xì)胞懸浮液，30℃培養(yǎng) 1 小時(shí)。 

7. 加入 5μg 載體（環(huán)狀或線性 DNA）和 150μg Carrier DNA（已經(jīng)過(guò) 100℃加熱 10 分鐘， 并迅速冷卻）。 

   注意：pAUR101 需使用線性 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀 DNA 會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成 功。pAUR112 和 pAUR123 需使用完整的質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

8. 加入 850 μl Solution B（配方：取 40 g Polyethylene Glycol 4000 溶于 100 ml Solution A  充分溶解，需要現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕混勻。 

9. 30℃培養(yǎng) 30 分鐘后，42℃培養(yǎng) 15 分鐘。 

10. 室溫放置 10 分鐘。 

11. 5,000 rpm 離心 1 分鐘，用 5 ml YPD 培養(yǎng)基懸浮沉淀。 

12. 30℃培養(yǎng) 6 小時(shí)~過(guò)夜。 

13. 5,000~10,000 rpm 離心，用 1-10 ml 0.9% NaCl 懸浮沉淀。

14. 在 YPD 選擇培養(yǎng)基平板（含有一定濃度的 AbA，依菌株類型而定）上接種 100 μl 細(xì)胞 懸液。30℃培養(yǎng) 3-4 天后轉(zhuǎn)化完成。 

15. 挑取陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，和/或測(cè)定轉(zhuǎn)化效率（以每微克質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來(lái)表示）。

注意事項(xiàng)： 

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

2. AbA 的最佳工作濃度因宿主細(xì)胞不同而有差異，可根據(jù)最低抑菌濃度（MIC）來(lái)確定。